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剖析酶標(biāo)儀的檢測(cè)原理
更新時(shí)間：2015-12-02 點(diǎn)擊次數(shù)：2472次
酶標(biāo)儀實(shí)際上就是一臺(tái)變相光電比色計(jì)或分光光度計(jì)，其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計(jì)基本相同.檢測(cè)原理介紹如下：
光是電磁波，波長(zhǎng)100nm——400nm稱為紫外光，400nm——780nm之間的光可被人眼觀察到，大子780nm稱為紅外光。人們只所以能夠看到色彩，是因?yàn)楣庹丈涞轿矬w上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色，是因?yàn)橹参镂樟斯庵械募t色光譜。酶標(biāo)儀測(cè)定的原理是在特定波長(zhǎng)下，檢測(cè)被測(cè)物的吸光值。
檢測(cè)單位：
光通過被檢測(cè)物，前后的能量差異即是被檢測(cè)物吸收掉的能量，特定波長(zhǎng)下，同一種被檢測(cè)物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。
檢測(cè)單位用OD值表示，OD是optical delnsity（光密度）的縮寫，表示被檢測(cè)物吸收掉的光密度， OD＝1og（1/trans），其中trans為檢測(cè)物的透光值。根據(jù)Bouger-amberT-beer法則，OD值與光強(qiáng)度成下述關(guān)系：
E＝OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度，Ι0為在檢測(cè)物之前的光強(qiáng)度，Ι為從被檢測(cè)物出來的光強(qiáng)度。
OD值由下述公式計(jì)算：
E＝OD=C×D×E
C為檢測(cè)物的濃度
D為檢測(cè)物的厚度
E為摩爾因子
在特定波長(zhǎng)下測(cè)定每一種物質(zhì)都有其特定的波長(zhǎng)，在此波長(zhǎng)下，此物質(zhì)能夠吸收多的光能量。如果選擇其它的波長(zhǎng)段，就會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確。因此，在測(cè)定檢測(cè)物時(shí)，我們選擇特定的波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)，稱為測(cè)量波長(zhǎng)。
但是每一種物質(zhì)對(duì)光能量還存在一定的非特異性吸收，為了消除這種非特異性吸收，我們?cè)龠x取一個(gè)參照波長(zhǎng)，以消除這個(gè)不準(zhǔn)確性。在參照波長(zhǎng)下，檢測(cè)物光的吸收小。檢測(cè)波長(zhǎng)和參照波長(zhǎng)的吸光值之差可以消除非特異性吸收。
酶標(biāo)儀檢測(cè)值計(jì)算
儀器中的檢測(cè)器接收透過被檢測(cè)物的光能量，轉(zhuǎn)換成二進(jìn)位數(shù)字信號(hào)，大為4095。儀器定義沒有光源下的透光值為0%，沒有檢測(cè)物的透光值為100%。則實(shí)際檢測(cè)中，檢測(cè)物的透光值均在0%——100%之間。透光值的計(jì)算如下：
T＝（Meas-Min）/（Max-Min）
其中T為透光值，Meas為檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值，Min為在0%的情況下檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值，Max為在100%的情況下檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值，舉例如下：
Max=3600 Mn=20 Meas＝30
T=（30-20）/3600-20)＝0．0028
OD＝1og（1/T）=1og（1/0.0028）=2.552
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